一、低溫冷凍保藏：常用的“休眠術”

 

　　低溫可顯著降低微生物代謝速率，是保藏的核心思路。其中，-80℃超低溫冰箱或液氮（-196℃）冷凍是經典的方法。操作時需注意兩點：一是添加保護劑（如10%-20%甘油、5%二甲基亞砜），避免冰晶刺破細胞；二是控制降溫速率（約1℃/分鐘），減少細胞內冰晶形成。例如，大腸桿菌、酵母菌等常規菌株經甘油管冷凍后，可穩定保存3-5年；環境微生物（如嗜熱菌）則需更低溫度（液氮）以抑制其殘留代謝。

 

　　二、凍干保藏：“脫水+真空”的雙重保險

 

　　冷凍干燥（凍干）通過“預凍-升華脫水-密封”三步，將菌種制成干燥的粉末狀安瓿。其優勢在于去除水分（微生物代謝需水參與），同時真空環境隔絕氧氣與雜菌污染。實際操作中，常用脫脂牛奶或血清作為保護基質（提供營養并緩沖滲透壓），預凍溫度需低于-40℃，確保菌體凍結。凍干菌種可在4℃避光保存5-10年，尤其適合放線菌、霉菌等難保藏菌株，但需注意復溶時需無菌操作，避免二次污染。

 

　　三、定期傳代與斜面保藏：基礎但需謹慎

 

　　對于短期使用（數周至數月）的菌種，斜面或半固體穿刺保藏是便捷選擇。將菌種接種于含營養瓊脂的斜面，25-37℃培養后，4℃冷藏可延緩代謝。但此方法依賴頻繁傳代（每1-3個月轉接一次），易因傳代次數過多導致變異（如質粒丟失、性狀退化）。因此，僅推薦作為臨時保藏手段，長期保存需結合其他方法。

 

　　四、特殊菌種的針對性策略

 

　　厭氧菌需嚴格無氧環境，可采用庖肉培養基（含肉渣耗氧）或充氮密封保藏；病毒或噬菌體則需宿主細胞共保藏（如大腸桿菌與λ噬菌體共凍存）；古菌因細胞壁結構特殊，常需添加復合保護劑（如海藻糖+甘油）增強抗逆性。