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一、載體構(gòu)建的基本實(shí)驗(yàn)步驟
(1)目的DNA片段和載體的制備;
(2)目的DNA片段和載體的連接;
(3)連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化;
(4)克隆篩選。
(5)測(cè)序驗(yàn)證及結(jié)果交付
二、詳細(xì)內(nèi)容
1、以PCR擴(kuò)增為基礎(chǔ)的各類載體構(gòu)建,如大腸桿菌表達(dá)載體、酵母表達(dá)載體、桿狀病毒表達(dá)載體、哺乳動(dòng)物表達(dá)載體;報(bào)告基因載體等;
2、基因定點(diǎn)突變,包括單點(diǎn)突變,多點(diǎn)突變,基因缺失等;
3、載體元件替換和改造;
4、siRNA載體和miRNA表達(dá)載體構(gòu)建;
5、過表達(dá)載體構(gòu)建。
| pCR-BluntII-TOPO-LINC01547(有突變)(human)基因模板質(zhì)粒 |
| pCR-BluntII-TOPO-TMEM51-AS1(有突變)(human)基因模板質(zhì)粒 |
| pCR-BluntII-TOPO-CCDC162P(有突變)(human)基因模板質(zhì)粒 |
| pENTR4-FLAG基因模板質(zhì)粒 |
| pENTR-His基因模板質(zhì)粒 |
| pSV40-Map4-m基因模板質(zhì)粒 |
| pDC316-mCMV-EGFP-Linker-MTAP(human)(2同義突變)蛋白表達(dá)質(zhì)粒 |
| pCDH-EF1a-3×FLAG-MCS-T2A-Puro蛋白表達(dá)質(zhì)粒 |
| pLVshRNA-U6-METTL14(mouse)-shRNA3-PGK-EGFP-E2A-Puro基因沉默質(zhì)粒 |

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