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一、載體構建的基本實驗步驟
(1)目的DNA片段和載體的制備;
(2)目的DNA片段和載體的連接;
(3)連接產物的轉化;
(4)克隆篩選。
(5)測序驗證及結果交付
二、詳細內容
1、以PCR擴增為基礎的各類載體構建,如大腸桿菌表達載體、酵母表達載體、桿狀病毒表達載體、哺乳動物表達載體;報告基因載體等;
2、基因定點突變,包括單點突變,多點突變,基因缺失等;
3、載體元件替換和改造;
4、siRNA載體和miRNA表達載體構建;
5、過表達載體構建。
| pENTR-His基因模板質粒 |
| pSV40-Map4-m基因模板質粒 |
| pDC316-mCMV-EGFP-Linker-MTAP(human)(2同義突變)蛋白表達質粒 |
| pCDH-EF1a-3×FLAG-MCS-T2A-Puro蛋白表達質粒 |
| pLVshRNA-U6-METTL14(mouse)-shRNA3-PGK-EGFP-E2A-Puro基因沉默質粒 |
| pLVshRNA-U6-IQGAP1(human)-shRNA1-PGK-EGFP-E2A-Puro基因沉默質粒 |
| pLVshRNA-U6-RAB11FIP2(mouse)-shRNA3-PGK-EGFP-E2A-Puro基因沉默質粒 |
| pLVshRNA-U6-ARID3A(human)-shRNA3-PGK-EGFP-E2A-Puro基因沉默質粒 |
| pLVX-CMV-PD-1(mouse)-PGK-Puro蛋白表達質粒 |

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